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Chemoenzymatische Synthese von definiert sulfatierten Oligohyaluronanen für Bindungsstudien und den Aufbau von artifizeillen extrazellulären Matrizes

Prof. Dr. rer.nat. Jörg Rademann, PD Dr. rer.nat. Jürgen Schiller, Katharina Lemmnitzer, Sebastian Köhling, Joanna Blaszkiewicz

Durch Vorarbeiten ist bekannt, dass polysulfatierte Glykosaminoglykane in der Lage sind, Wundheilungsprozesse zu stimulieren, indem sie gezielt an bestimmte Zytokine und Wachstumsfaktoren binden. Im Rahmen der neuen Förderperiode sollen Struktur-Aktivitätsbeziehungen von definiert sulfatierten Oligohyaluronanen (Oligo-HA) als Liganden von Mediatoren und Wachstumsfaktoren sowie als Grundbausteine für aEZM im Detail untersucht werden.

Für die Synthese von definiert sulfatierten Oligo-HA wurden erfolgreich chemoenzymatische Verfahren entwickelt und eine Kollektion von definiert sulfatierten Hyaluronan-Tetra, Hexa- und Octasacchariden hergestellt. Die selektive Protektion und Ligation des reduzierenden, anomeren Endes lieferte Fluoreszenz- und Spin-markierte HA-Konjugate für Bindungsassays, Strukturanalysen, die Immobilisierung an Oberflächen und für funktionelle biologische Studien. Die erhaltenen Aktivitätsprofile sollen nun für die Entwicklung spezifischer, maßgeschneiderter Proteinliganden genutzt werden. Schließlich werden ausgehend von optimierten Proteinliganden rational entworfene Biomaterialien (insbesondere GAG mit definierten Sulfatierungspositionen) synthetisiert. Künstliche, relativ kleine Proteoglykane und sulfatierte GAG-konjugierte Proteine werden als multivalente Assemblierungen definiert sulfatierter GAG entwickelt und untersucht.

Die mehrdimensionale, massenspektrometrische (MS) Charakterisierung hochsulfatierter Verbindungen wird durch die Labilität der Sulfatester-Bindung (und in geringerem Maße der glykosidischen Bindung) erschwert. Wir konnten bereits an niedrigsulfatierten GAG zeigen, dass die Ionenmobilitäts-MS eine hervorragende Methode zur Charakterisierung isomerer Zuckersulfate ist, die bei entsprechender Optimierung der Messbedingungen nahezu ohne Fragmentionenbildung detektiert werden können. Diese Arbeiten sollen an höhersulfatierten Oligosacchariden fortgesetzt und mit Ergebnissen der PFG-(pulsed field gradient)-NMR verglichen werden, da hier im Unterschied zur MS keine Bildung von Fragmenten zu erwarten ist und die Untersuchungen in Lösung durchgeführt werden.

 

Publikationen

  1. Koehler L, Samsonov S, Rother S, Vogel S, Köhling S, Moeller S, Schnabelrauch M, Rademann J, Hempel U, Pisabarro MT, Scharnweber D, Hintze V. Sulfated hyaluronan derivatives modulate TGF-?1:receptor complex formation: possible consequences for TGF-?1 signaling. Sci Rep. 2017; 7: 1210.
  2. Rother S, Samsonov SA, Moeller S, Schnabelrauch M, Rademann J, Blaszkiewicz J, Köhling S, Waltenberger J, Pisabarro MT, Scharnweber D, Hintze V. Sulfated hyaluronan alters endothelial cell activation in vitro by controlling the biological activity of the angiogenic factors vascular endothelial growth factor-A and tissue inhibitor of metalloproteinase-3. ACS Appl Mater Interfaces. 2017; 9: 9539-50.
  3. Lemmnitzer K, Riemer T, Groessl M, Süß R, Knochenmuss R, Schiller J. Comparison of ion mobility-mass spectrometry and pulsed-field gradient nuclear magnetic resonance spectroscopy for the differentiation of chondroitin sulfate isomers. Anal Methods. 2016;8: 8483-91.
  4. Köhling S, Exner MP, Nojoumi S, Schiller J, Budisa N, Rademann J. One-pot synthesis of anomeric glycosyl thiols from highly functionalized unprotected sugars in water for use in glycan ligation reactions. Angew Chem Int Ed. 2016;55:15510-4.
  5. Köhling S, Künze G, Lemmnitzer K, Bermudez M, Wolber G, Schiller J, Huster D, Rademann J. Chemoenzymatic synthesis of nonasulfated tetrahyaluronan with a paramagnetic tag for studying its complex with interleukin-10. Chem Eur J. 2016;22:5563-74.
  6. Nimptsch A, Schiller J. The selected matrix influences the matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectral patterns of partially deuterated glycosaminoglycan disaccharides. Rapid Commun Mass Spectrom. 2016; 30: 2164-70.
  7. Künze G, Köhling S, Vogel A, Rademann J, Huster D. Identification of the glycosaminoglycan binding site of interleukin-10 by NMR spectroscopy. J Biol Chem. 2016;291:3100-13.
  8. Panitz N, Theisgen S, Samsonov SA, Gehrcke JP, Baumann L, Bellmann-Sickert K, Köhling S, Pisabarro MT, Rademann J, Huster D, Beck-Sickinger AG. The structural investigation of gly-cosaminoglycan binding to CXCL12 displays distinct interaction sites. Glycobiology. 2016; 26(11):1209-1221.
  9. Rother S, Samsonov S, Hempel U, Vogel S, Möller S, Blaszkiewicz J, Köhling S, Schnabelrauch M, Rademann J, Pisabarro MT, Hintze V, Scharnweber D. Sulfated hyaluronan alters the interaction profile of TIMP-3 with the endocytic receptor LRP-1 cluster II and IV and increas-es the extracellular TIMP-3 level of human bone marrow stromal cells. Biomacromolecules. 2016;17:3252-61.
  10. Rother S, Samsonov SA, Hofmann T, Köhling S, Blaszkiewicz J, Moeller S, Schnabelrauch M, Rademann J, Kalkhof S, von Bergen M, Pisabarro MT, Scharnweber D, Hintze V. Structural and functional insights into the interaction of sulfated glycosaminoglycans with tissue inhibitor of metalloproteinase-3 - A possible regulatory role on extracellular matrix homeostasis. Acta Biomater. 2016; 45;143-54.
  11. Hofmann T, Samsonov SA, Pichert A, Lemmnitzer K, Schiller J, Huster D, Pisabarro MT, von Bergen M, Kalkhof S. Structural analysis of the interleukin-8/glycosaminoglycan interactions by amide hydrogen/deuterium exchange mass spectrometry. Methods. 2015; 89:45-53.
  12. Lemmnitzer K, Schiller J, Becher J, Möller S, Schnabelrauch M. Improvement of the digestibility of sulfated hyaluronans by bovine testicular hyaluronidase: a UV spectroscopic and mass spectrometric study. Biomed Res Int. 2014;2014:986594.
  13. Penk A, Förster Y, Scheidt HA, Nimptsch A, Hacker MC, Schulz-Siegmund M, Ahnert P, Schiller J, Rammelt S, Huster D. The pore size of PLGA bone implants determines the de novo formation of bone tissue in tibial head defects in rats. Magn Reson Med. 2013; 70:925-35. Schnabelrauch M, Scharnweber D, Schiller J. Sulfated glycosaminoglycans as promising artificial extracellular matrix components to improve the regeneration of tissues. Curr Med Chem. 2013; 20: 2501-23.
  14. Horatscheck A, Wagner S, Ortwein J, Lisurek M, Kim BG, Beligny S, Schütz A, Rademann J. Benzoylphosphonate-based photoactive phosphopeptide mimetics for functional modulation of protein tyrosine phosphatases and highly specific covalent labeling of SH2-domains, Angew. Chem. 2012, 124, 9577-9583; Angew. Chem. Int. Ed. 2012, 51, 9441-9447.
  15. Böhme J, Anderegg U, Nimptsch A, Nimptsch K, Hacker M, Schulz-Siegmund M, Huster D, Schiller J. De novo biosynthesis of glycosaminoglycans in the extracellular matrix of skin studied by matrix-assisted laser desorption/ionization mass spectrometry. Anal Biochem. 2012; 421: 791-3.
  16. Nimptsch K, Süß R, Schnabelrauch M, Nimptsch A, Schiller J. Positive ion MALDI-TOF mass spectra are more suitable than negative ion spectra to characterize sulphated glycosaminoglycans. Int J Mass Spectrom. 2012; 310: 72-6.
  17. Stübs G, Rupp B, Schiller J, Becher J, Möller S, Nimptsch K, Riemer T, Schnabelrauch M. Synthesis and charac-terization of chemically modified glycosaminoglycans of the extracellular matrix. Mini-Rev Org Chem. 2010; 7: 290-9.
  18. Schumann RR, Schröder NWJ, Rademann J. Chemoenzymatic synthesis of a glycolipid library and elucidation of the antigenic epitope for construction of a vaccine against Lyme disease. Chem Eur J. 2010; 16: 3536-44.
  19. Nimptsch K, Süss R, Riemer T, Nimptsch A, Schnabelrauch M, Schiller J. Differently complex oligosaccharides can be easily identified by matrix-assisted laser desorption and ionization time-of-flight mass spectrometry directly from a standard thin-layer chromatography plate. J Chromatogr A. 2010; 1217: 3711-5.
  20. Weinert S, Jabs S, Supanchart C, Schweizer M, Gimber N, Richter M, Rademann J. Stauber T, Kornak U, Jentsch TJ. Lysosomal Pathology and Osteopetrosis upon Loss of H+-Driven Lysosomal Cl- Accumulation. Science. 2010; 328: 1401-13.
  21. Schmidt M, El-Dahshan A, Keller S, Rademann J. Selective identification of cooperatively binding fragments in a high-throughput assay enables development of a picomolar caspase-3 inhibitor. Angew Chem Int Ed. 2009; 48: 6346-9.
  22. Nimptsch A, Schibur S, Schnabelrauch M, Fuchs B, Huster D, Schiller J. Characterization of the quantitative rela-tionship between signal-to-noise (S/N) ratio and sample amount on-target by MALDI-TOF MS: Determination of chondroitin sulfate subsequent to enzymatic digestion. Anal Chim Acta. 2009; 635: 175-82.
  23. Bauer J, Brandenburg K, Zähringer U, Rademann J. Chemical synthesis of a glycolipid library by a solid phase strategy allows to elucidate the structural specificity of immune stimulation by rhamnolipids. Chem Eur J. 2006; 12: 7116-24.
  24. Bauer J, Rademann J. Hydrophobically assisted switching phase synthesis: The flexible combination of solid-phase and solution-phase reactions employed for oligosaccharide preparation. J Am Chem Soc. 2005; 127: 7296-7.
  25. Rademann J, Geyer A, Schmidt RR. Solid-Phase Supported Synthesis of the Branched Pentasaccharide Moiety That Occurs in Most Complex Type N-Glycan Chains. Angew Chem Int Ed Engl. 1998; 37: 1241-5.
  26. Rademann J, Schmidt RR. Repetitive solid phase glycosylation on an alkyl-thiol polymer leading to sugar oli-gomers containing 1,2-trans- and 1,2-cis-glycosidic linkages. J Org Chem. 1997; 62: 3650-3.